Enzymologie Approfondie Cours PDF
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Cours:
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Objectifs de l’enseignement:
Comprendre au niveau structural et cinétique les interactions moléculaires protéine/protéine et protéine/Ligand, connaître le fonctionnement des différents types d’enzymes Michaéliènnes, à plusieurs substrats et allostériques, connaitre les applications du génie enzymatique en industrie).
Connaissances préalables recommandées:
Les pré-requis pour ce module consistent à avoir des connaissances suffisantes acquises dans la matière de Biochimie enseigné en L2.
Contenu de la matière :
I.Généralités:
II.Structure et propriétés des enzymes:
-Enzymes monomériques (chymotrypsine)
-Enzymes oligomériques
-Isoenzymes (LDH)
-Complexes multienzymatiques (FAS)
III.Interactions protéines-ligands:
-Association sur un site.
-Association sur n sites équivalents et indépendants.
-Association d’un ligand sur deux sites différents.
IV.Cinétique Enzymatique:
-Cinétique michaélienne à un substrat (rappel)
-Cinétique à deux substrats
-Cinétique à plusieurs substrats
V.Fonctionnement et régulation des enzymes allostériques:
-Propriétés structurales
-Propriétés fonctionnelles
-Détermination des constantes cinétiques à partir de représentation graphique (Hill…)
VI.Mécanisme de la catalyse:
-Topologie et identification des centres actifs.
-Fonctionnement des coenzymes.
-Activation des zymogènes.
-Marqueurs spécifiques des centres catalytiques.
-Mécanismes d’action des sérines protéases.
-Mécanisme d’action des pyridoxal transférases.
VII.Isolement et purification des enzymes:
-Origine
-Méthodes d’études
VIII.Génie enzymatique:
-Nature et origine des enzymes
VIII.1-Méthodes d’immobilisation des enzymes:
-Méthode physique : immobilisation par adsorption
-Méthode chimique : immobilisation par fixation covalente sur un support.
-Immobilisation des enzymes et utilisation en bioréacteurs
VIII.2-Applications des enzymes en biotechnologie:
-Préparations industrielles des enzymes
- Production à l’échelle industrielle
-Applications dans les domaines industriels (pharmaceutiques, cosmétiques, agronomiques)
-Biocapteurs enzymatiques
-Les enzymes artificielles
IX.Travaux dirigés:
-L'objectif est de développer l’aptitude à raisonner sur des problèmes d’enzymologie et d'apprendre à appliquer les concepts vus en cours pour interpréter des données expérimentales. Les TD se feront sous forme de :
-Exercices illustrant chaque chapitre
-Analyses d’articles portant sur les différents points abordés en cours
X.Travaux Pratique:
-Protocole de purification d’enzymes :
-Extraction,
-Fractionnement
-Purification
-Critères d’homogénéité
-Etude des activités des enzymes et l’influence de certains paramètres physico-chimiques.